脂质体2000是专门用于将核酸转染进入真核细胞的一种形式,

我们提供下列的建议: 在多种细胞和培养板中都有很高的转染效率。

在网上列出的细胞类型中都获得了较高的转染效率。  

核酸-脂质体2000的复合物可以直接加入到细胞培养液中,无论是有血清还是无血清的情况。  

转染之后不用移除复合物或者更换培养液,但是复合物应在转染后4-6h移除。

 转染的一些重要指导 DNA转染使用page3  我们建议使用Opti-MEM I reduced serum  培养基来稀释11668019脂质体2000和核酸。 

转染时不要向培养基中加入抗生素。 在实验过程中要保持一样的条件

DNA转染  使用下列方法在24孔板内转染DNA进入哺乳动物细胞。对于其他的板子,

可以参考page4.所有的数量和体积都是基于一个孔的剂量。

准备复合物使DNA(ug):脂质体(ul)的比例为1:2到1:3。

转染时细胞密度较高可以获得高的效率,高的表达水平,以及使毒性降低。

条件的选择很重要。  1. 贴壁细胞:在转染前一天,向24孔板内接种0.5-2*105个细胞,使得细胞在转染时融合 率达到90-95%。

切记使用不含抗生素的培养基。 

2. 对于每一个转染样品,按照如下方法准备复合物:  

A. 使用无血清的培养基将DNA稀释为50ul,温和混匀。 

B. 使用前混匀11668019脂质体2000,然后用培养基将一定量的脂质体2000稀释为50ul。室温 孵育5min。  进行到c时间不超过25min      

C.5min的孵育后,混合稀释的DNA和稀释的脂质体2000(总体积为100ul)。温和混匀,室温孵育20min(溶液呈现云雾状)。        

 混合物在室温可稳定存在6h。  

3. 向含有细胞和培养液的板子中每孔加入100ul的复合物,通过敲打板子和来回晃动使其 混合均匀。  

4. 细胞孵育18-48h后可检测转染情况。培养液可在转染4-6h后更换。 

5. 对稳定的细胞系:传代细胞在转染后以1:10的比例加入新鲜的培养液。

天加入选择 培养基。   优化转染  为了获得高的转染效率和低毒性,通过调整细胞浓度和DNA11668019脂质体2000的比例来优化转染条件。

确保细胞90%的融合,以及DNA(ug):脂质体(ul)比例在1:0.5到1:5。    

转染条件的浮动    转染到不同类型的培养板中,

脂质体2000的,核酸的量,细胞数以及合适的培养基量,都在下表中显示。在96孔板中,建议总体积到50ul

Lipofectamine® 2000转染试剂是一种多用途转染试剂,可在各种贴壁和悬浮细胞系中提供高效转染。研究人员可使用Lipofectamine® 2000试剂进行基于siRNA和shRNA的基因敲除实验及基因表达研究。Lipofectamine® 2000是Life Technologies提供的用于siRNA和质粒DNA共转染的*试剂。