细胞《一步法恒温支原体检测试剂盒》详细介绍

 

《一步法恒温支原体检测试剂盒》主要用于检测细胞培养上清或别的液体样品中是否含有支原体污染，该试剂盒仅用于基础科研。

《一步法恒温支原体检测试剂盒》采用独特的恒温基因扩增技术和显色技术，对样品的支原体基因组DNA进行恒温扩增，反应完后，通过反应管的颜色即可对结果进行判断。

《一步法恒温支原体检测试剂盒》八大优点

（1） 方便，整个检测过程只需一步即可完成。

（2） 省时，整个检测过程只需1小时，而PCR法通常需要2-3小时。

（3）灵敏度良好，一般比30个循环普通PCR灵敏度高。

（4）无需样品的前处理。由于细胞培养数天后，培养液中经常含有严重抑制PCR扩增的代谢物，所以样品的前处理一般是PCR法不可或缺的环节。而RD-RCA扩增不受抑制，无需样品的前处理。

（5）无需样品的离心浓缩，检测只需1微升培养液即可。

（6）无需用到PCR仪、电泳槽、凝胶成像仪、离心机等仪器，整个检测只需一个水浴锅即可完成。

（7）无需电泳，无需接触EB等诱癌物质。根据反应管的指示剂，肉眼即可判断反应结果。

（8）产品稳定性好，冻干型产品可以在室温至少放置2个月，-20 ℃至少可以放置2年。

将有支原体污染的细胞培养液上清用水做系列稀释（RD-RCA做10倍系列稀释、PCR做5倍系列稀释），而后分别用《一步法恒温支原体检测试剂盒》和普通PCR进行支原体检测。

    如右图所示，采用RD-RCA法的《一步法恒温支原体检测试剂盒》在稀释10000倍后仍呈明显的阳性而普通PCR(30 cycles)在稀释125倍后呈勉强的弱阳性，二者灵敏度至少相差80倍。

    另外一个值得高度注意的是：用细胞培养上清原液进行PCR检测居然呈明显的阴性！而原液用水稀释5倍后，PCR却呈阳性。说明：细胞培养上清原液含有强烈抑制PCR的代谢物！

    与此形成鲜明对比的是：采用RD-RCA法的《一步法恒温支原体检测试剂盒》却能在细胞培养上清原液中检测出支原体污染！说明：同样的代谢产物虽然强烈抑制PCR却不会抑制RD-RCA的正常扩增。

    这是RD-RCA法的巨大优势！如此，RD-RCA就不需要进行样品的稀释或者进行支原体DNA的抽提等的前处理。

 

 

特别提醒：

         该实验也说明：如果使用的PCR法支原体检测试剂盒没有内参对照，而直接使用细胞培养上清原液进行PCR检测，检测结果即使为阴性，也不能说明其没有支原体污染，极有可能是PCR的扩增被细胞的代谢产物抑制了！这个问题绝大部分进行支原体检测的人员都不会注意，这是利用无内参对照的PCR法进行支原体检测的致命弱点!

【注：由于本公司现在生产的《PCR法支原体检测试剂盒》（货号：PM008），含内参对照，已经可以区分真阴性样品（样品无支原体污染。电泳结果：有内参条带，无支原体特异条带）和假阴性样品（PCR被代谢产物抑制。电泳结果：内参条带和支原体特异条带都没有）。详情请参考本公司生产的《PCR法支原体检测试剂盒》说明书】

 

        有关PCR的扩增会被细胞的代谢产物抑制的问题，Sigma公司的LookOut Mycoplasma PCR Detection Kit（货号MP0035-1 kit）的PCR法支原体检测试剂盒说明书中也特别提到了这点，其强烈建议用试剂盒进行DNA提取后再进行检测。可见这是利用PCR法进行支原体检测过程中普遍遇到的问题，应该引起科研工作者的高度重视！否则，由此引起的假阴性（培养时间越久，概率越高），将使无内参对照的PCR法进行的支原体检测变得毫无意义！

 

本公司所有恒温基因检测产品主要以冻干品的形式提供（如右图所示）。《一步法恒温支原体检测试剂盒》同样以冻干品的形式提供。

采用先进的冻干技术，将所有扩增成分都冻干在一个0.2 mL的PCR管中，使用时只需加入水化液和待测样品，整个检测过程一步即可完成，非常简单。

此外，由于冻干品的稳定性非常好，可以在室温保存至少2个月，这样非常方便运输和储存，也非常适合在野外或者污染点进行即时检测。该工艺的创新极大的扩展了相关产品的市场应用前景。